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如細胞培養體系中存在支原體污染，可能造成細胞生長緩慢、染色體異常、代謝異常、轉染效率低、病毒包裝效率低、細胞死亡等。造成實驗重復性低、結果不可信。由于支原體大小為0.1-0.3μm，無法通過過濾去除，無細胞壁結構，普通抗生素如青霉素等也無效，造成研究者細胞損失。

北京澤平代理的Lonza支原體系列產品，提供從支原體檢測、支原體清除、到支原體預防的全套試劑和配套檢測儀器，輕松解決各類支原體污染問題。
 

一、Lonza支原體檢測試劑盒

Lonza MycoAlert支原體檢測試劑盒（MycoAlert PLUS Mycoplasma Detection Kit），可在20分鐘內快速檢測細胞培養物是否存在支原體污染。其利用了180多種支原體中廣泛存在的支原體酶（在脲原體屬、細菌、酵母中少見），當活支原體被MycoAlert試劑裂解后，支原體酶釋放到培養液中，并與MycoAlert底物特異性反應，催化ADP轉化為ATP，ATP與熒光素酶發生反應產生光信號，通過檢測底物加入前后讀數的比值，可判斷樣本中是否含有支原體。



①酶學檢測，操作簡單，20分鐘出結果，輕松量化陰性、陽性；
②覆蓋范圍廣，可檢測44種支原體，包含細胞培養中最常見的6種支原體（口腔支原體、精氨酸支原體、豬鼻支原體、萊氏無膽甾原體、發酵支原體、唾液支原體，占支原體污染的95%）




支原體檢測流程

1、取2mL培養基上清（建議培養48小時以上），200g離心5分鐘，去除細胞和細胞碎片；
2、取100μL上清，加入100μL裂解試劑（MycoAlert PLUS Reagent，含裂解試劑、熒光素酶、熒光素），裂解支原體；
3、室溫22℃（不超過25℃）孵育5分鐘，檢測背景ATP，測量發光值得到讀數A；
4、加入100μL支原體酶特異性底物（MycoAlert PLUS Substrate）；
5、室溫孵育10分鐘，測量發光值得到讀數B，計算B/A比值。
 

結果解讀

二、支原體檢測儀器

1、Lonza專用單孔生物發光檢測儀器Lucetta 2

①小型便攜式管式光度計，一鍵式檢測，不需要復雜的軟件設置；
②應用廣泛，兩種基本檢測模式，高靈敏度和線性度，最多可儲存2000個單一樣本讀數；
③無特殊耗材，只需要無菌1.5mL離心管即可檢測。

 

2、多孔單功能發光檢測儀或多功能酶標儀

如使用多功能酶標儀檢測，要選擇Luminescence檢測功能，不需要設置濾光片；如果使用多孔板檢測，要用不透明的白板或黑板。

 

三、Lonza支原體清除試劑盒

當發現存在支原體污染，但樣品格外難得不可丟棄時，Lonza MycoZap支原體去除試劑，可在4天內清除支原體，拯救珍貴的細胞樣品。MycoZap支原體去除試劑，結合抗生素和抗代謝試劑，確保徹底清除支原體。在隨后的4-6周內，可以使用Lonza MycoAlert支原體檢測試劑盒進行不間斷檢測，以保證后續培養物不被污染。

①使用范圍廣，可徹底清除支原體、無膽甾原體、植物花螺原體等柔膜菌綱物種；
②使用簡單，只需將支原體清除試劑加入培養基中；
③細胞毒性小，不影響細胞正常培養。



 

四、Lonza支原體預防試劑盒

Lonza MycoZap支原體預防試劑（MycoZap Prophylactic），是一種特異性預防支原體污染的抗生素，其中MycoZap Plus可預防包括支原體、革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌、真菌、酵母在內的多種微生物污染，其配方根據細胞系、原代細胞進行了特殊優化。

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——Lonza中國一級代理商，北京澤平